La interleuquina 6 está involucrada en la inmunopatogénesis de la queratoconjuntivitis por adenovirus / Interleukin 6 is a cytokine involved in theimmunopathogenesis of adenoviral keratoconjunctivitis

Los receptores tipo toll (RTT) desempeñan un papel importante en la respuesta inmune innata en las infecciones oculares, particularmente las producidas por adenovirus (Ad). Los objetivos de este estudio fueron determinar si la infección adenoviral induce citocinas proinflamatorias en células epiteliales corneales (CEC) humanas y evaluar la contribución de los RTT al microambiente pro inflamatorio por las células epiteliales limbales (CEL) humanas. Métodos: Las CEC fueron aisladas de córneas humanas sanas y cultivadas en medio epitelial hormonal suplementado hasta su confluencia. Las CEL fueron obtenidas a partir de rodetes limbales humanos y cultivadas en medio KSFM hasta su confluencia. Posteriormente, las CEC fueron infectadas con Ad5 y cultivadas en diferentes tiempos (24 h, 48 h, 72 h). Las CEL fueron estimuladas con agonistas de RTT por 24 h. Los sobrenadantes de cultivo fueron recuperados y analizados por ELISA para determinar las concentraciones de interleucina (IL) 1b, IL-6, factor de necorsis tumoral alfa (FNT-α) e interferón alfa (IFN-α). Resultados: La infección de CEC por Ad5 indujo la producción de IL-6 desde las 24 h. No se detectó IL-1b, FNT-α o IFN-α en los sobrenadantes de cultivo de las células infectadas en ningún tiempo de cultivo. La estimulación por agonistas de RTT en CEL indujo la producción de IL-6 a través de RTT8> RTT4 = RTT2. Conclusiones: La infección por Ad5 indujo la producción de IL-6 por CEC. El RTT8 podría estar implicado con la producción de esta citocina en CEL.

Toll-like receptors (TLRs) play an important role in theinnate immune response to ocular infections particularlyby adenovirus (Ad). The objectives of this study were todetermine whether adenoviral infection inducesproinflammatory cytokines by human corneal epithelialcells (CEC) and to evaluate TLR contribution to the proinflammatorymicroenvironment by human limbalepithelial cells (LEC). Methods: CEC were isolated fromhuman healthy corneas and grown in supplementedhormonal epithelial medium until confluence. LEC wereobtained from human limbal rims, and cultured in KSFMmedium until confluence. Then CEC were infected withAd5 and cultured at different times (24 h, 48 h, 72 h).LEC were stimulated with TLRs-agonist for 24 h. Culturessupernatants were recovered and analyzed by ELISA todetermine IL-1b, IL-6, TNF-α and IFN-α concentrations.Results: Ad5 infection of CEC induced the production ofIL-6 since 24 h. Nor IL-1b, TNF-α, or IFN-α were detectedin the culture supernatants of infected cells in any timeof culture. TLRs-agonist stimulation of LEC induced IL-6production through TLR8 > TLR4 = TLR2. Conclusions:Ad5 infection induced IL-6 production by CEC. TLR8 couldbe implicated in the production of this cytokine in LEC.

Caracterización fenotípica de células epiteliales limbales humanas expandidas in vitro / In vitro phenotypic characterization of human limbal epithelial cells

Introducción: Las células epiteliales limbales humanas (CELhu) han sido utilizadas en la clínica para promover la rápida reepitelización en enfermedades de la superficie ocular con la finalidad de restaurar la integridad del epitelio corneal. Sin embargo, esta técnica aún no ha sido desarrollada en nuestro país. El objetivo de este estudio fue desarrollar una técnica de cultivo de CELhu in vitro y caracterizar su fenotipo. Material y métodos: Las células fueron obtenidas de tejido limbal, cultivadas en medio KSFM y analizadas para la expresión de vimentina, K, K19, p63 y K12 por citometría de flujo e inmunofluorescencia. Resultados: El fenotipo de las células cultivadas fue vimentina+K+K19+p63+K12-. Conclusiones: Nuestros resultados sugieren que bajo estas condiciones de cultivo, las CELhu mantuvieron el fenotipo de célula pluripotencial. Esta técnica de cultivo podría ser utilizada con propósitos clínicos en nuestro país.

INTRODUCTION: Human limbal epithelial cells (huLEC) have been used for clinical purposes in ocular surface diseases to promote rapid re-epithelisation and restore corneal epithelium integrity. However, in Mexico this technique has not been fully developed. This study was conducted to characterize the huLEC phenotype expanded in vitro using a cell culture technique. MATERIAL AND METHODS: Cells were obtained from limbal tissue, cultured in KSFM medium and analyzed for the expression of vimentin, K, K19, p63, K12, by flow cytometry and immuno-fluorescence. RESULTS: The phenotype of cultured cells was vimentin+K+K19+ p63+K12-. CONCLUSIONS: Our results suggest that under these culture conditions huLEC maintained their stem cell phenotype. This culture technique could be used for clinical purposes in Mexico.